人干擾素γ（IFN-γ）ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號(hào)： HG-IF002

產(chǎn)品簡介：

BlueKit^® 系列人干擾素 Y(IFN-Y)ELISA檢測試劑盒采用雙抗夾心法，用于定量檢測血清、血漿或細(xì)胞上清中人IFN-γ蛋白的含量。將特異性抗人IFN-γ單克隆抗體包被在微孔板上，反應(yīng)孔內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本、檢測抗體，室溫(18-25°C)孵育,洗滌后再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育。洗滌后加入顯色液 TMB。顏色反應(yīng)的深淺與目標(biāo)蛋白濃度成正比。

檢測范圍:4.69-300 pg/mL

靈 敏 度:0.36 pg/mL

精密度:CV%≤10%，RE%<±15%

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物學(xué)樣本中人 IFN-γ 蛋白含量測定。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲(chǔ)溫度均為 2~8℃，有效期12個(gè)月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆微孔板恒溫振蕩器  

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

試劑配制

1x洗液根據(jù)實(shí)際用量，取適量10x濃縮洗液用去離子水 10 倍稀釋)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

人IFN-γ 標(biāo)準(zhǔn)品S 3000pg/mL 40μL+360 μLSD 稀釋后作為高標(biāo)準(zhǔn)（300pg/mL）。每個(gè)稀釋試管中加入200μLSD，使用高標(biāo)準(zhǔn)制備1：1稀釋系列。在進(jìn)行下一步轉(zhuǎn)移之前徹i底混合每個(gè)試管。SD用作零標(biāo)準(zhǔn)（0pg/mL）。

操作步驟

檢測之前請將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫（18-25℃）。

1. 準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

2. 將不需要的板條拆卸下來，放回鋁箔袋，重新封好封口。

3. 每孔加入50μL檢測緩沖液（AB）。
4. 加入50μL的標(biāo)準(zhǔn)品（S）、樣本。保證連續(xù)加樣，請不要間斷。加樣過程在15分鐘內(nèi)完成。
5. 每孔加入50μL檢測抗體（DA）。
6. 使用封板膜封板。500轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，25℃孵育1小時(shí)。
7. 棄掉孔內(nèi)液體，每孔加入300μL洗液洗板，洗滌4次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)性能，必須徹i底移除殘留液體。
8.加入100μL酶結(jié)合物（SH）。
9.使用新的封板膜封板。500轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，室溫（18-25℃）孵育30分鐘。
10.重復(fù)步驟7。
11.每孔加入100μL顯色液，避光室溫（18-25℃）孵育10-15分鐘。
12.每孔加入100μL終止液。
13. 20 min 內(nèi)讀取 450nm/630nm 波長處的吸光度值。450nm 作為檢測波長，630nm 作為參比波長。

結(jié)果處理

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實(shí)際測定為準(zhǔn)）

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對應(yīng)OD值取1og后進(jìn)行直線擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（如下圖所示）

注意事項(xiàng)

1. 樣品首i次檢測，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋，以在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品。
2. 試劑按標(biāo)簽說明儲(chǔ)存，使用前室溫（18-25℃）平衡。
3. 包被酶標(biāo)板使用前，請平衡至室溫（18-25℃）再打開外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個(gè)月。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
4. 實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
5. 使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。
6. 洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物顯色液對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。
8. 本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請?jiān)谛趦?nèi)使用。

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